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关于批量设计SSR引物的问题

柳城,你好 按你的方法设计了引物,可是primer3运行之后没有out 文件输出,所以无法进行下一步,这是什么原因啊?请指点

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引物设计时简并碱基在3'端对PCR扩增的影响?

有时简并碱基出现在3'端的引物中,对PCR扩增影响如何? 还是同时设计两条引物(不用简并碱基)对扩增结果比较好?